Sisältö

• Tärkein ero
• Southern blotting vs. Western blotting
• Vertailutaulukko
• Mikä on Southern blotting?
• Mikä on Western blotting?
• Keskeiset erot
• johtopäätös

Tärkein ero

Tärkein ero Southern blottingin ja Western blottingin välillä on se, että Southern blotting on tekniikka, jota käytetään spesifisen DNA-fragmentin havaitsemiseksi tietyssä näytteessä, kun taas Western blotting -menetelmää käytetään tietyn proteiinin selvittämiseen tietyssä näytteessä.

Southern blotting vs. Western blotting

Blottaus on tekniikka, jota tutkijat käyttävät erottamaan erityyppiset molekyylit seoksesta tai näytteestä. Tässä tekniikassa makromolekyylit, kuten nukleiinihapot (DNA ja RNA) ja proteiinit seoksessa liikkuvat geelilaatan läpi. Täällä pienikokoiset hiukkaset liikkuvat nopeammin kuin suuremmat. Nämä molekyylit puristetaan liikkumattoman kalvon pintaa vasten, joka siirtää molekyylit kalvoon. On erityyppisiä blottauksia spesifisen materiaalin havaitsemisen perusteella, toisin sanoen eteläinen blottaus, pohjoinen blottointi ja länsimainen blottaus. Southern-blottaus on tyyppi blottausta, jota käytetään DNA: n havaitsemiseen, kun taas Western-blottausta käytetään proteiinin selvittämiseen. Southern-blottauksen kehitti Edward M. Southern vuonna 1975. Joten se tunnetaan nimellä Southern-blottaus. Toisaalta länsimaisen blottauksen kehitti George Starkin ryhmä Stanfordin yliopistossa vuonna 1979. Tätä nimeä käytettiin vastaamaan eteläistä blottausta. Southern-blottausta käytetään tietyn DNA-sekvenssin selvittämiseen, kun taas Western-blottausta käytetään tietyn aminohappo- tai proteiinisekvenssin selvittämiseen.

Vertailutaulukko

Mikä on Southern blotting?

Southern-blottaus on vanhin puhdistusmenetelmä, jonka Edwin Southern antoi, nimeltään eteläinen blottaus. Sitä käytetään tietyn DNA-sekvenssin selvittämiseen tietyssä näytteessä tai seoksessa. Vaiheet, jotka liittyvät eteläisen blottauksen aikana, ovat elektroforeesi, siirto ja spesifisten sekvenssien havaitseminen. Ensinnäkin DNA hajotetaan spesifisen restriktioentsyymin avulla. Sitten halutut DNA-fragmentit erotetaan geelielektroforeesilla. Nämä fragmentit denaturoidaan alkalisen liuoksen, esim. NaOH: n jne. Avulla, kahden DNA-juosteen erottamiseksi. Nämä yksijuosteiset DNA-fragmentit siirrettiin sitten membraanille blottausprosessin kautta. Tätä membraaniin rajoitettua DNA: ta käsitellään sitten leimatulla koettimella. Tämä koetin kiinnittyy sen komplementaariseen juosteeseen kalvo-DNA: ssa, joka voidaan visualisoida autoradiogrammin avulla jne.

Mikä on Western blotting?

George Starkin ryhmä kekseli Stanfordin yliopistossa Western blotting -menetelmän, jota käytetään proteiinin aminohappojen spesifisen sekvenssin tunnistamiseen. Se tunnetaan myös proteiiniblotina tai immuuniblottointina. Vaiheet Western-blottauksen aikana ovat elektroforeesi, siirto ja spesifisten proteiinien havaitseminen. Ensin homogenoi seos. Erota sitten kiinnostava molekyyli elektroforeesin avulla. Siirrä nämä molekyylit kalvolle ja identifioi spesifinen proteiini spesifisen koettimen avulla.

Keskeiset erot

1. Tekniikka, jota käytetään tietyn DNA-sekvenssin selvittämiseen tietyssä seoksessa, tunnetaan nimellä Southern blotting, kun taas tekniikka, jota käytetään tietyn seoksen proteiinin spesifisten aminohapposekvenssien selvittämiseen, tunnetaan nimellä Southern blot.
2. Edward M. Southern kehitti eteläisen blottauksen vuonna 1975, niin kutsuttu eteläinen blottaus. Toisaalta länsimaisen blottauksen kehitti George Starkin ryhmä Stanfordin yliopistossa vuonna 1979.
3. Southern-blottausta käytetään tietyn DNA-sekvenssin selvittämiseen. Toisaalta, Western blot -menetelmää käytetään tietyn aminohappo- tai proteiinisekvenssin selvittämiseen.
4. Southern-blottaus toimii hybridisaation periaatteella kääntöpuolella; Western-blottaus toimii immuunimääritysmenetelmän tai antigeeni-vasta-ainevuorovaikutuksen periaatteella.
5. Yksijuosteista DNA: ta tai joskus RNA: ta käytetään koettimena Etelä-blottauksessa toisella puolella, Western-blottauksessa primaarisia ja sekundaarisia vasta-aineita käytetään koettimena.
6. Agarose-geelielektroforeesia käytetään eteläisessä blottauksessa, kun taas SDS PAGE / polyakryyliamidigeeliä käytetään proteiinien erottamiseen Western-blottauksessa.
7. Southern-blottaus seuraa toisaalta kapillaarinsiirtomenetelmää; Western Blotting noudattaa sähkönsiirtomenettelyä.
8. Southern-blottauksen aikana näyte on denaturoitava, kun taas länsimaisen blottauksen aikana näytteen on oltava alkuperäisessä tilassaan.
9. Mikään mikään vaihe, kuten estäminen, ei koske eteläistä blottausta läpän puolella, länsimaisen blottauksen aikana ei-spesifiset vasta-ainekohdat estetään nitroselluloosapaperilla maitojauheen tai naudan seerumialbumiinin (BSA) avulla.
10. Eteläisessä blottauksessa käytettyjä yleisiä merkintämenetelmiä ovat kromogeenisten väriaineiden käyttö tai radioleimatut tai fluoresoivat merkinnät jne., Kun taas Western blotting -menetelmissä käytetään fluoresoivasti leimatun vasta-aineen tai radioleimauksen, kromogeenisten väriaineiden tai diaminobentsidiinin muodostumista jne.
11. Valon havaitsemista, autoradiografia ja värimuutoksia käytetään havaitsemismenetelminä eteläisen blottauksen yhteydessä, kun taas länsimaisen blottauksen havaitsemismenetelminä ovat värimuutokset ja valon havaitseminen jne.
12. Southern-blottausta käytetään DNA: n havaitsemiseen, isyystesteihin, DNA: n sormitukseen, uhrin tunnistamiseen, rikollisten tunnistamiseen, tartunta-aineiden löytämiseen ja mutaation tai geenien uudelleenjärjestelyn tunnistamiseen jne. Päinvastoin, Western blot -menetelmää käytetään proteiinimäärän löytämiseen Seos, HIV: n, viruksen ja bakteerien jne. esiintymisen havaitsemiseksi seerumissa, viallisten proteiinien selvittämiseksi, ja niitä käytettiin varmasti toimenpiteenä herpes, B-hepatiitti, Lymen tauti ja Creutzfeldt-Jacob-tauti jne.

johtopäätös

Yllä olevasta keskustelusta tehdään yhteenveto siitä, että eteläinen blottaus on vanhin blottaustekniikka, jota käytetään spesifisen DNA-segmentin selvittämiseen näytteessä, kun taas Western blotting löydettiin viimeksi mainitusta, ja sitä käytettiin aminohappojen spesifisen sekvenssin tai tietyn proteiinin tunnistamiseen.